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使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術

使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術使用傳統體外方法生產的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養基，培養可能具有挑戰性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應器系統以節省空間、資源和時間的方式同時培養多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續生產大量用于下游實驗的EV。一、生物反應器接種、適應和維護培養基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養基B：AdvancedDMEM/F-12(...

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細胞培養常見問題匯總

細胞培養常見問題匯總1冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后...

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層析工藝放大需要遵循的原則

層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數和洗脫樣品CV數，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實際的應用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設備供應商提供的層析柱都是幾個固定規格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當層析柱直...

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熒光定量PCR實驗中PCR儀器選購技巧

聚合酶鏈反應(PCR)技術是無數研究和測試實驗室的主要技術，涉及的領域包括生物醫學、基因編輯、食品微生物學測試等。熒光定量PCR技術使用熱循環來促進一系列反應，在這些反應中，DNA樣本會快速、呈指數地復制，從而產生數百萬或數十億個序列拷貝。購買PCR儀器時，重要的是要考慮您的應用的最終目標、熱循環設備的準確性和效率以及儀器的容量和靈活性。本文概述了PCR儀器可用的不同選項和功能，以幫助您選購合適的PCR儀。1.PCR與qPCR與dPCR雖然所有PCR系統都使用聚合酶鏈式反應復...

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應用差速離心法分離外泌體的原理

外泌體是一種小的(40-100nm)細胞外膜囊泡，目前進行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應用差速離心法和粒徑分析等是細胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機制各不相同具體取決于細胞的類型和當前狀態。通常可以辨別出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細胞的細胞質和質膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時...

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